SW620/5-FU人結直腸癌細胞氟尿嘧啶耐藥株

細胞介紹

SW620是從一個51歲男性白人組織中分離得到,。 由A.Leibovitz等從一個淋巴結建株,。細胞系主要由無絨毛的小園球細胞和雙極細胞組成。它僅合成少量癌胚抗原（CEA）且在裸鼠中有高度的致瘤性,。

注：本培養(yǎng)基是不直接添加氟尿嘧啶藥物的,。

細胞特性

（1）來源：結直腸腺癌，來自轉移淋巴結

（2）形態(tài)：上皮細胞樣  貼壁生長

（3）含量：>1×106  細胞數(shù)

（4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

（5）用途：僅供科研使用

SW620/5-FU人結直腸癌細胞氟尿嘧啶耐藥株

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù),。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況,。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收,，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL,，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,，可以對細胞進行傳代處理,。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收,。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。      

1、細胞培養(yǎng)條件及相關試劑的配制

（1）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，100%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

（2）準備L15培養(yǎng)基（推薦0009）：優(yōu)質胎牛血清,，10%,；雙抗，1% ,，可添加5-Fu濃度為：400~1065uM,；

注意：

1. 細胞在傳代和剛復蘇時較為脆弱，中止液須為不含5-Fu的*培養(yǎng)基,，且在細胞未貼壁期間和貼壁前期需用不含5-Fu的*培養(yǎng)基,，待細胞生長狀態(tài)穩(wěn)定時再根據(jù)需要濃度添加5-Fu。

2.若細胞生長狀態(tài)較為緩慢時,，可適當降低5-Fu的濃度,，或使用不含5-Fu的*培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的5-Fu濃度,。

（3）凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二．細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，*培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間）,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。

注意：如還有部分細胞未消化下來，可采用分步消化：

a. 準備一個無菌的15mL離心管,，加入2mL含10%FBS的*培養(yǎng)基,；

b.將消化下來的細胞吸入①中的離心管內中和（避免吹打）,；

c.向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入1mL 0.25%胰蛋白酶繼續(xù)消化2min左右，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細胞脫落后加入2mL含10%FBS的*培養(yǎng)基中和,，中和后的細胞懸液移入①中的離心管內。 

3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。